പോളിഅക്രിലാമൈഡ് ജെൽ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസിനുള്ള മുൻകരുതലുകൾ

· പോളിഅക്രിലാമൈഡ്ജെൽ അക്രിലാമൈഡ് മോണോമർ, പോളിമറൈസേഷൻ ആരംഭ മെറ്റീരിയൽ, ഉൽപ്രേരകം, ഉപ്പ്, ബഫർ മിശ്രിതം എന്നിവ ഒരുമിച്ച് ഉപയോഗിക്കണം.

· അക്രിലാമൈഡ്കൂടാതെ BIS (N, N '- മെത്തിലീൻ ഡബിൾ അക്രിലാമൈഡ്) ആണ് ജെൽ മാട്രിക്സ് രൂപത്തിലുള്ള മോണോമർ.

· അമോണിയം പെർസൾഫേറ്റ് പശ പോളിമറൈസേഷൻ പ്രക്രിയ ആരംഭിക്കുന്നു. പശയുടെ രൂപീകരണത്തിന് വെള്ളത്തിൽ തയ്യാറാക്കിയ 10% അമോണിയം പെർസൾഫേറ്റ് ലായനി ആവശ്യമാണ്. മിക്ക വിവരങ്ങളും സജീവ ഉപയോഗത്തിന്റെ ആവശ്യകതയെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു. എന്നിരുന്നാലും, 10% ലായനി പ്രവർത്തനത്തിൽ കാര്യമായ നഷ്ടമില്ലാതെ നിരവധി ആഴ്ചകൾ 4 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ സ്ഥാപിക്കാം. 10 മില്ലി വരെ ഉണ്ടാക്കുക, പശ കൂട്ടിച്ചേർക്കാൻ കഴിയാതെ വരുമ്പോൾ ഉപേക്ഷിക്കുക.

നുറുങ്ങ്: ശതമാനംഅക്രിലാമൈഡ്ക്രമത്തിൽ പശയും പ്രോട്ടീൻ പശയും ഒരുപോലെയല്ല. മുൻകൂട്ടി തയ്യാറാക്കിയ അക്രിലാമൈഡ്: ബിഐഎസ് ലായനി ഉപയോഗിക്കുകയാണെങ്കിൽ, ശരിയായ കുപ്പി വാങ്ങുന്നത് ഉറപ്പാക്കുക.

· TEMED (N, N, N ', N '- ടെട്രാമീഥൈൽ എഥിലീനെഡിയമൈൻ) ഒരു ഉത്തേജകമാണ്, ഇത് ഒരു തവിട്ട് കുപ്പിയിൽ റഫ്രിജറേറ്ററിൽ സ്ഥാപിച്ചിരിക്കുന്നു. പശ ഒഴിക്കുന്നതിന് തൊട്ടുമുമ്പ് ചേർക്കുക.

· പോളിഅക്രിലാമൈഡ് ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് ഉപയോഗിച്ച ഗ്ലാസ് ഇലക്ട്രോഫോറെസിസിൽ ഓരോ തവണയും മുമ്പും ശേഷവും കഴുകണം. ഇലക്ട്രോഫോറെസിസിന് ശേഷം, മൃദുവായ ബ്രഷും തുണിയും ഉപയോഗിച്ച് ചൂടുള്ള സോപ്പ് വെള്ളത്തിൽ കഴുകുക, വാറ്റിയെടുത്ത വെള്ളം ഉപയോഗിച്ച് കഴുകി ഉണങ്ങാൻ വയ്ക്കുക.

· പൊള്ളയായ പോളിമറിൽ ഈർപ്പവും പൊടിയും ഉണ്ടാകാം. ഇലക്ട്രോഫോറെസിസിന് മുമ്പ്, ഗ്ലാസ് പ്ലേറ്റ് ഗ്ലാസ് ക്ലീനർ ഉപയോഗിച്ച് വൃത്തിയാക്കി മൃദുവായ ബ്രഷ് ഉപയോഗിച്ച് തുടയ്ക്കുക. വാറ്റിയെടുത്ത വെള്ളത്തിൽ കഴുകി പേപ്പർ വൈപ്പ് ഉപയോഗിച്ച് നന്നായി ഉണക്കുക. പേപ്പർ ഉപയോഗിച്ച് തുടയ്ക്കുന്നതിന് മുമ്പ് 70% എത്തനോൾ ഉപയോഗിച്ച് കഴുകുന്നത് വൃത്തിയാക്കാനും ഉണക്കൽ വേഗത്തിലാക്കാനും സഹായിക്കുന്നു. അക്രിലാമൈഡിന്റെ സാമ്പിളുകൾ തുടർച്ചയായി ചേർക്കുക: BIS, വെള്ളം, ബഫർ ലായനി, അമോണിയം പെർസൾഫേറ്റ്, TEMED. നന്നായി കുലുക്കി ഉടൻ ഒഴിക്കുക.

പോളിമറൈസേഷന് മുമ്പ് പോളിഅക്രിലാമൈഡ് വാതകം നീക്കം ചെയ്യേണ്ട ആവശ്യമില്ല. (ഓക്സിജൻ പോളിമറൈസേഷനെ തടയുന്നതിനാൽ കുമിളകൾ നീക്കം ചെയ്യുന്നതിനായി അക്രിലാമൈഡ് ഒരു ശൂന്യതയിൽ സ്ഥാപിക്കാറുണ്ടായിരുന്നു.)

തിരശ്ചീന പശ പോയിന്റ് സാമ്പിൾ നുറുങ്ങുകൾ.

· താഴെയുള്ള ബോക്സിൽ ഒരു കറുത്ത കടലാസ് കഷണം വയ്ക്കുക, കൂടുതൽ വ്യക്തമായി കാണാൻ കുറച്ച് സാമ്പിൾ ദ്വാരം ഉണ്ടാക്കാൻ കറുത്ത പശ്ചാത്തലം.
· കൊളോയിഡിന് തൊട്ടു മുകളിലായി പശ ടാങ്ക് നിറച്ച ബഫർ.
· അരികിൽ ഒരു ലൈറ്റ് ഉണ്ടെങ്കിൽ, ലൈറ്റുകൾ ഓണാക്കുക, പ്രകാശം കൊളോയിഡ് ആയി പ്രകാശിക്കട്ടെ. സാമ്പിൾ പൈപ്പറ്റിലേക്ക് വരയ്ക്കുക.
· ഓട്ടോമാറ്റിക് പൈപ്പറ്റിംഗ് ഉപകരണം ഉപയോഗിച്ച്.
· 10-200 mu ൽ 1 ദ്രാവക ചലിക്കുന്ന പോയിന്റ് സാമ്പിളിലെ മിക്ക പോയിന്റുകളിലും ഉപയോഗിക്കാം. വളരെ ചെറിയ സാമ്പിൾ ദ്വാരങ്ങൾക്ക് (10μ1 ൽ താഴെ), പശ ക്രമപ്പെടുത്തുന്നതിന് ഉപയോഗിക്കുന്ന നീളമുള്ള പൈപ്പറ്റ് ഹെഡ് കൂടുതൽ സൗകര്യപ്രദമാണ്.

· സാമ്പിളിൽ മുക്കി പൈപ്പ് ഇടൽ, പതുക്കെ ചലിക്കുന്ന ദ്രാവകം ശ്വസിക്കൽ. സാമ്പിൾ ഗ്ലിസറിനുമായി പറ്റിപ്പിടിച്ചിരിക്കുന്നതായി തോന്നിയേക്കാം, വേഗത്തിലുള്ള പമ്പിംഗ് പൈപ്പറ്റ് ഹെഡിലേക്ക് വായു കുമിളകൾ വലിച്ചെടുക്കാൻ കാരണമായേക്കാം.

· പൈപ്പറ്റിംഗ് ഹെഡ് ശ്വസിച്ച ശേഷം സാമ്പിളുകൾ പൈപ്പിന്റെ അരികിലൂടെയോ അല്ലെങ്കിൽ തുടയ്ക്കുന്ന പേപ്പർ സക്ക് ലിക്വിഡ് ഹെഡ് തുള്ളികൾക്ക് പുറത്തേക്ക് നീക്കും. സാമ്പിൾ വലിച്ചെടുക്കാതിരിക്കാൻ ശ്രദ്ധിക്കുക.

സാമ്പിൾ ദ്വാരത്തിൽ സാമ്പിൾ വയ്ക്കുക

· അല്പം മർദ്ദം നിലനിർത്താൻ പൈപ്പറ്റിംഗ് ഉപകരണം, സാമ്പിളുകൾ ഓവർഫ്ലോ ലിക്വിഡ് ഹെഡ് ചെറുതായി ചലിപ്പിക്കുക.
· ബഫറിലേക്ക് തിരുകിയ പൈപ്പറ്റിംഗ് ഹെഡ്, സ്പോട്ട് ഹോളുകളേക്കാൾ അല്പം ഉയരത്തിൽ, പോസിറ്റീവ് മർദ്ദം നിലനിർത്തുന്നു. പൈപ്പറ്റിന്റെ അഗ്രം ഒരു ചെറിയ ദ്വാരത്തിലേക്ക് തിരുകാൻ കഴിയും.
· സാമ്പിളുകൾ സാവധാനത്തിലും സ്ഥിരതയോടെയും പുറത്തെടുക്കുക. പൈപ്പറ്റ് അഗ്രം പോയിന്റ് സാമ്പിൾ ദ്വാരത്തിന് മുകളിൽ സ്ഥാപിച്ചിരിക്കുന്നു, സാമ്പിൾ ദ്വാരത്തിലേക്ക് താഴും. സാമ്പിൾ ദ്വാരം നിറയ്ക്കാൻ സാമ്പിൾ മുങ്ങാൻ അനുവദിക്കുക, അകത്തേക്ക് തള്ളുന്നതിന് പകരം.
· ദ്രാവക തലയുള്ള സാമ്പിളിന്റെ അവസാന തുള്ളി ഒരിക്കൽ കൂടി കഴിഞ്ഞാൽ, ദ്രാവകം രണ്ടാമത്തെ പാദത്തിലേക്ക് നീങ്ങും, പതുക്കെ ദ്രാവക നീക്കം ഉയർത്തി ബഫറിൽ നിന്ന് പുറത്തേക്ക് നീങ്ങും.

ലംബമായ പശ സാമ്പിൾ എങ്ങനെ ചെയ്യാം?

· രണ്ട് ഗ്ലാസ് കഷണങ്ങൾക്കിടയിൽ ലംബമായ പശ പോയിന്റ് സാമ്പിൾ ദ്വാരങ്ങൾ രൂപപ്പെടുത്തി. വളരെ നേർത്ത പശയിൽ, രണ്ട് ഗ്ലാസ് പ്ലേറ്റുകൾക്കിടയിൽ പോലും പൈപ്പറ്റ് ഹെഡ് ചേർക്കാൻ കഴിയില്ല. ഗ്ലിസറിൻ ശ്രദ്ധിക്കുക! സാമ്പിൾ ദ്വാരത്തിന് മുകളിൽ പൈപ്പറ്റ് ഹെഡ് വയ്ക്കുക, സാമ്പിൾ ദ്വാരത്തിലേക്ക് താഴും.
· സാമ്പിൾ എടുക്കുന്നതിന് മുമ്പ്, പോളിപ്രൊഫൈലിൻ അസൈൽ ജെൽ ഉപയോഗിച്ച് ലംബമായി വയ്ക്കുന്നത് ഉറപ്പാക്കുക, സാമ്പിൾ ദ്വാരം കഴുകി വൃത്തിയാക്കുക. പോളിമറൈസ് ചെയ്യാത്ത അക്രിലാമൈഡും സാമ്പിൾ ദ്വാരത്തിന്റെ അടിയിൽ പ്രത്യക്ഷപ്പെടാവുന്ന വെള്ളവും കഴുകിക്കളയുക. വെള്ളം സാമ്പിൾ ദ്വാരത്തെ ഗണ്യമായി ചെറുതാക്കും. 25ml അല്ലെങ്കിൽ 50ml സിറിഞ്ചും 18-ഗേജ് സൂചിയും ഉപയോഗിക്കുക. ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് ബഫർ ഒഴിച്ച് സാമ്പിൾ ദ്വാരം ശ്രദ്ധാപൂർവ്വം ഫ്ലഷ് ചെയ്യുക.
· സാമ്പിൾ ദ്വാരം കാണാൻ ബുദ്ധിമുട്ടായിരിക്കും, എന്നാൽ അതേ സമയം, ബാക്കിയുള്ളത് എളുപ്പമാണ്. അധിക ദ്വാരങ്ങൾ ഉണ്ടെങ്കിൽ, സാമ്പിൾ ബഫർ ബ്രോമോഫെനോൾ നീല ഉപയോഗിച്ച് പരിശോധിക്കാവുന്നതാണ്.