പോളിഅക്രിലാമൈഡ് ജെൽ ഇലക്ട്രോഫോറെസിസിനുള്ള മുൻകരുതലുകൾ

· പോളിഅക്രിലാമൈഡ്ജെൽ അക്രിലാമൈഡ് മോണോമർ, പോളിമറൈസേഷൻ സ്റ്റാർട്ടിംഗ് മെറ്റീരിയൽ, കാറ്റലിസ്റ്റ്, ഉപ്പ്, ബഫർ മിശ്രിതത്തിൻ്റെ വലത് എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് വേണം.

· അക്രിലമൈഡ്കൂടാതെ ബിഐഎസ് (N, N '- മെത്തിലീൻ ഡബിൾ അക്രിലമൈഡ്) ആണ് മോണോമർ ഫോം ജെൽ മാട്രിക്സ്.

അമോണിയം പെർസൾഫേറ്റ് പശ പോളിമറൈസേഷൻ പ്രക്രിയ ആരംഭിക്കുന്നു. പശയുടെ രൂപീകരണത്തിന് വെള്ളത്തിൽ തയ്യാറാക്കിയ 10% അമോണിയം പെർസൾഫേറ്റ് ലായനി ആവശ്യമാണ്. മിക്ക വിവരങ്ങളും സജീവമായ ഉപയോഗത്തിൻ്റെ ആവശ്യകത സൂചിപ്പിച്ചു. എന്നിരുന്നാലും, 10% ലായനി 4℃-ൽ നിരവധി ആഴ്ചകളോളം പ്രവർത്തനം നഷ്ടപ്പെടാതെ വയ്ക്കാം. 10 മില്ലി വരെ ഉണ്ടാക്കുക, പശ കൂട്ടിച്ചേർക്കാൻ കഴിയാതെ വരുമ്പോൾ ഉപേക്ഷിക്കുക.

നുറുങ്ങ്: ശതമാനംഅക്രിലമൈഡ്പശയും പ്രോട്ടീൻ പശയും ക്രമപ്പെടുത്തുന്നതിൽ ഒരുപോലെയല്ല. മുൻകൂട്ടി തയ്യാറാക്കിയ അക്രിലമൈഡ്: ബിഐഎസ് ലായനി ഉപയോഗിക്കുകയാണെങ്കിൽ, ശരിയായ കുപ്പി ലഭിക്കുന്നത് ഉറപ്പാക്കുക.

· TEMED (N, N, N ', N '- ടെട്രാമെഥൈൽ എഥിലീനെഡിയമൈൻ) ഒരു ഉത്തേജകമാണ്, തവിട്ട് നിറത്തിലുള്ള കുപ്പിയിൽ, റഫ്രിജറേറ്ററിൽ സ്ഥാപിച്ചിരിക്കുന്നു. പശ ഒഴിക്കുന്നതിന് തൊട്ടുമുമ്പ് ചേർക്കുക.

ഇലക്ട്രോഫോറെസിസിൽ പോളിഅക്രിലാമൈഡ് ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് ഉപയോഗിച്ച ഗ്ലാസ് ഓരോ തവണയും മുമ്പും ശേഷവും കഴുകണം. ഇലക്ട്രോഫോറെസിസിനു ശേഷം, ചൂടുള്ള സോപ്പ് വെള്ളത്തിൽ മൃദുവായ ബ്രഷും തുണിയും ഉപയോഗിച്ച് കഴുകുക, വാറ്റിയെടുത്ത വെള്ളത്തിൽ കഴുകുക, ഉണങ്ങാൻ നിൽക്കുക.

പൊള്ളയായ പോളിമർ ഉപയോഗിച്ച് ഈർപ്പവും പൊടിയും ഉണ്ടാകാം. ഇലക്ട്രോഫോറെസിസിന് മുമ്പ്, ഗ്ലാസ് ക്ലീനർ ഉപയോഗിച്ച് ഗ്ലാസ് പ്ലേറ്റ് വൃത്തിയാക്കി മൃദുവായ ബ്രഷ് ഉപയോഗിച്ച് തുടയ്ക്കുക. വാറ്റിയെടുത്ത വെള്ളം ഉപയോഗിച്ച് കഴുകി പേപ്പർ തുടച്ച് നന്നായി ഉണക്കുക. പേപ്പർ ഉപയോഗിച്ച് തുടയ്ക്കുന്നതിന് മുമ്പ് 70% എത്തനോൾ ഉപയോഗിച്ച് കഴുകുന്നത് വൃത്തിയാക്കാനും ഉണങ്ങുന്നത് വേഗത്തിലാക്കാനും സഹായിക്കുന്നു. അക്രിലമൈഡിൻ്റെ സാമ്പിളുകൾ തുടർച്ചയായി ചേർക്കുക: BIS, വെള്ളം, ബഫർ ലായനി, അമോണിയം പെർസൾഫേറ്റ്, TEMED. നന്നായി കുലുക്കി ഉടൻ ഒഴിക്കുക.

പോളിമറൈസേഷന് മുമ്പ് പോളിഅക്രിലാമൈഡ് ഡീഗാസ് ചെയ്യേണ്ട ആവശ്യമില്ല. (ഓക്സിജൻ പോളിമറൈസേഷനെ തടയുന്നതിനാൽ കുമിളകൾ നീക്കം ചെയ്യുന്നതിനായി അക്രിലാമൈഡ് ഒരു ശൂന്യതയിൽ സ്ഥാപിച്ചിരുന്നു.)

തിരശ്ചീന പശ പോയിൻ്റ് സാമ്പിൾ നുറുങ്ങുകൾ.

താഴെയുള്ള ബോക്സിൽ ഒരു കറുത്ത പേപ്പർ ഇടുക, കൂടുതൽ വ്യക്തമായി കാണുന്നതിന് കുറച്ച് സാമ്പിൾ ദ്വാരം ഉണ്ടാക്കാൻ കറുത്ത പശ്ചാത്തലം.
· പശ ടാങ്ക് നിറച്ച ബഫർ, കൊളോയിഡിന് മുകളിൽ.
· അരികിൽ ഒരു ലൈറ്റ് ഉണ്ടെങ്കിൽ, ലൈറ്റുകൾ ഓണാക്കുക, പ്രകാശം കൊളോയിഡ് പ്രകാശിക്കട്ടെ. പൈപ്പറ്റിലേക്ക് സാമ്പിൾ വരയ്ക്കുക.
· ഓട്ടോമാറ്റിക് പൈപ്പറ്റിംഗ് ഉപകരണം ഉപയോഗിക്കുന്നു.
· 10-200 mu 1 ദ്രാവക ചലിക്കുന്ന പോയിൻ്റ് സാമ്പിളിലെ മിക്ക പോയിൻ്റുകളിലും ഉപയോഗിക്കാം. വളരെ ചെറിയ സാമ്പിൾ ദ്വാരങ്ങൾക്ക് (10μ1-ൽ താഴെ), പശ ക്രമപ്പെടുത്തുന്നതിന് ഉപയോഗിക്കുന്ന നീളമുള്ള പൈപ്പറ്റ് ഹെഡ് കൂടുതൽ സൗകര്യപ്രദമാണ്.

സാമ്പിളിൽ മുഴുകി, സാവധാനം ചലിക്കുന്ന ദ്രാവകം ശ്വസിച്ച് പൈപ്പിംഗ്. സാമ്പിൾ ഗ്ലിസറിൻ ഉപയോഗിച്ച് ഒട്ടിപ്പിടിക്കുന്നതായി തോന്നാം, ദ്രുതഗതിയിലുള്ള പമ്പിംഗ് പൈപ്പറ്റ് തലയിലേക്ക് വായു കുമിളകൾ വരച്ചേക്കാം.

· പൈപ്പറ്റിംഗ് ഹെഡ് ശ്വസിച്ച ശേഷം സാമ്പിളുകൾ, പൈപ്പിൻ്റെ അരികിൽ ദ്രാവക തല മൃദുവായി ചലിപ്പിക്കും അല്ലെങ്കിൽ തുള്ളികൾക്ക് പുറത്ത് ദ്രാവക തല തുടയ്ക്കുക. സാമ്പിൾ വലിച്ചെടുക്കാതിരിക്കാൻ ശ്രദ്ധിക്കുക.

സാമ്പിൾ ദ്വാരത്തിലേക്ക് സാമ്പിൾ വയ്ക്കുക

ചെറിയ മർദ്ദം നിലനിർത്തുന്നതിനുള്ള പൈപ്പിംഗ് ഉപകരണം, സാമ്പിളുകൾ ചെറുതായി ഓവർഫ്ലോ ലിക്വിഡ് ഹെഡ് ചലിപ്പിക്കുക.
· സ്പോട്ട് ഹോളുകളേക്കാൾ അൽപ്പം ഉയരത്തിൽ, ബഫറിലേക്ക് പൈപ്പറ്റിംഗ് ഹെഡ് ചേർത്തു, പോസിറ്റീവ് മർദ്ദം നിലനിർത്തുന്നു. പൈപ്പറ്റിൻ്റെ അറ്റം ഒരു ചെറിയ ദ്വാരത്തിലേക്ക് തിരുകാം.
സാമ്പിളുകൾ സാവധാനത്തിലും സ്ഥിരമായും പുറത്തെടുക്കുന്നു. പോയിൻ്റ് സാമ്പിൾ ദ്വാരത്തിന് മുകളിൽ പൈപ്പറ്റ് ടിപ്പ് സ്ഥാപിച്ചിരിക്കുന്നു, സാമ്പിൾ ദ്വാരത്തിലേക്ക് മുങ്ങിപ്പോകും. അകത്തേക്ക് തള്ളുന്നതിന് പകരം സാമ്പിൾ ദ്വാരം നിറയ്ക്കാൻ സാമ്പിൾ മുങ്ങാൻ അനുവദിക്കുക.
ലിക്വിഡ് ഹെഡ് ഉള്ള സാമ്പിളിൻ്റെ അവസാന തുള്ളി ഒരിക്കൽ, ദ്രാവകം രണ്ടാമത്തെ കാലിലേക്ക് നീങ്ങും, ദ്രാവക ചലനം പതുക്കെ ഉയർത്തും, ബഫറിൽ നിന്ന് പുറത്തേക്ക് നീങ്ങും

ലംബമായ പശ സാമ്പിൾ എങ്ങനെ ചെയ്യാം?

· രണ്ട് ഗ്ലാസ് കഷണങ്ങൾക്കിടയിൽ രൂപംകൊണ്ട ലംബ പശ പോയിൻ്റ് സാമ്പിൾ ദ്വാരങ്ങൾ. വളരെ നേർത്ത പശയിൽ, രണ്ട് ഗ്ലാസ് പ്ലേറ്റുകൾക്കിടയിൽ പൈപ്പറ്റ് തല തിരുകാൻ പോലും കഴിയില്ല. ഗ്ലിസറിൻ ശ്രദ്ധിക്കുക! സാമ്പിൾ ദ്വാരത്തിന് മുകളിൽ പൈപ്പറ്റ് തല ഇടുക, സാമ്പിൾ ദ്വാരത്തിലേക്ക് മുങ്ങും.
· പോയിൻ്റ് സാമ്പിൾ മുമ്പ്, പോളിപ്രൊഫൈലിൻ അസൈൽ ജെൽ സാമ്പിൾ ദ്വാരം വെർട്ടിക്കൽ പോയിൻ്റ് ഇട്ടു ഉറപ്പാക്കുക വൃത്തിയായി കഴുകി. പോളിമറൈസ് ചെയ്യാത്ത അക്രിലമൈഡും സാമ്പിൾ ദ്വാരത്തിൻ്റെ അടിയിൽ പ്രത്യക്ഷപ്പെടുന്ന വെള്ളവും കഴുകുക. വെള്ളത്തിന് സാമ്പിൾ ദ്വാരം ഗണ്യമായി ചെറുതാക്കാൻ കഴിയും. 25 മില്ലി അല്ലെങ്കിൽ 50 മില്ലി സിറിഞ്ചും 18 ഗേജ് സൂചിയും ഉപയോഗിക്കുക. ഇലക്ട്രോഫോറെസിസ് ബഫറിൽ ഒഴിക്കുക, സാമ്പിൾ ദ്വാരം ശ്രദ്ധാപൂർവ്വം ഫ്ലഷ് ചെയ്യുക.
· സാമ്പിൾ ദ്വാരം കാണുന്നത് ബുദ്ധിമുട്ടാണ്, എന്നാൽ അതേ സമയം, ബാക്കിയുള്ളത് എളുപ്പമാണ്. അധിക ദ്വാരങ്ങൾ ഉണ്ടെങ്കിൽ, സാമ്പിൾ ബഫർ ബ്രോമോഫെനോൾ ബ്ലൂ ഉപയോഗിച്ച് പരിശോധിക്കാവുന്നതാണ്.